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  • 手动膜片钳与自动膜片钳的区别及优势?

    手动膜片钳优缺点  
    优点 缺点
    1:高信息量,可对各种种类的标本,如原代培养的神经元,脑片等进行记录
    2:应用范围广,可以分析检测所有的离子通道类型
    3:相对于荧光标记和放射性标记等手段具有更高权威性与精确性
    1:需要受过良好训练的电生理学专家
    2:通道很低
    3:实验操作复杂,劳动力密集
    4:不适合药物初筛
    5:技术自动化困难,不能进行平行试验
     
    自动膜片钳优缺点  
    优点 缺点
    1:效率高
    2:自动化,找细胞,形成封接,破膜等整个试验操作自动化
    3:传统膜片钳需要的一些一起不需要,如:显微镜,微电极拉制仪都不需要
    4:获得数据均一性高,人为因素少
    5:在药物微量加样设计方面表现优秀
    1:仅适用于悬浮细胞试验
    2:只能进行全细胞记录,穿孔膜片钳技术记录模式,细胞贴附式单通道记录模式,而不能进行其他模式记录
    3:仪器及耗材较手动膜片钳价格高
     

  • 什么是CiPA?

    近期美国FDA发起到了一个涉及多家机构和药企的广泛性的研究合作项目,Comprehensive In Vitro Proarrythmia Assay, 简称CiPA, 主要目的就是要找到更适合的替代方式来规范目前通行的对药物进行的临床前心脏安全评估,使临床发现的TDP跟临床前实验有更好的相关性,即基于心脏电生理机理的理解直接测试药物是否具有导致心律失常,而不仅仅是测试药物对hERG的抑制和QTc延长来预计TDP或严重心律失常的风险。

  • 美国FDA对药物临床前心脏安评有哪些指导规范?

    主要有S7A (人用药品安全药理的研究) 和S7B [ 人用药品延长心室复极( QT间期)风险的非临床评估]。另外药物心脏安评的临床研究有E14 (对非抗心律失常药物延长QT间期/矫正的QT间期及导致心律失常风险的临床评估)。

  • CFDA对药物临床前心脏安评有哪些指导规范?

    主要有《药物安全药理学研究技术指导原则》中涉及心血管系统的部分和《药物QT间期延长潜在作用非临床研究技术指导原则》。

  • 为什么hERG测试不能完全排除药物对心脏安全的危险?

    近期很多研究发现,有些药物不阻断hERG也会导致心律失常,而有些药物阻断了hERG也不一定就会导致心律失常,因此,对hERG离子通道的抑制性测试只是一个可参考指标,并不能因此就判断一个药物的心律失常风险。和心肌动作电位形成相关的离子通道除了hERG还有Nav1.5, Cav1.2, Kir2.1/2.2(IK1), Kv4.2/4.3(Ito), Kv1.5(IKur),KvLQT1(Iks)等等。目前很多企业会选择除了测试hERG还多做其它几个离子通道,这样得到的信息会更为全面,因为阻断或增强其他通道也是有可能会引起心律失常的。其实大多数药物当达到一定浓度的时候都会在一定程度上阻断hERG钾通道,但是它们大部分不会导致心律失常,这样的话假如就使用hERG这么一个指标,就会使得有些极具潜力的候选药物被误淘汰了。

  • 哪些已知药物因为引起QT间期延长而撤出市场?

    特非那定(Terfenadine)、西沙比利(Cisapride)、息斯敏(Astemizol)、格帕沙星(Grapafloxicin)等因为导致心电图QT间期延长所产生的严重心脏毒性而被撤出市场,敲响了人们对药物心脏安全评价的警钟。

  • 目前,对于心脏安全评估的科研项目有哪些?

    新药研发临床前研究中关于心脏安全评价方面从细胞水平到在体动物水平主要是包括四个方面:细胞层面的离子通道研究,组织层面的动作电位,离体器官层面的心脏离体灌注(langendorff)以及在体动物水平的实验。

  • 为什么hERG测试是心脏安评评估项目中必须要做的实验项目?

    目前大家选择做的最多的是hERG,因为这是FDA ICH 中S7B要求做的项目,这是基于早期发现导致心律失常的药物基本上都会阻断hERG而做出的规定。化合物阻断hERG后导致QT间期延长会更容易引发Tdp(扭转型心律失常)。

  • 药物临床前安全性评价有哪些?心脏安全评估又属于哪块?

    临床前安全评价包括安全药理学、单次给药毒性、重复给药毒性、遗传毒性、生殖毒性、致癌性、依赖性、与局部给药相关的特殊毒性。药物的心脏安全评估分布于安全药理学及毒性试验中与心血管相关的部分。

  • 膜片钳的实验对象,实验方法,实验机理及作用目的?

    膜片钳技术(Patch-clamp techniques)在1976年由德国科学家Erwin Neher博士和Berth Sakmann博士创建。通过微电极与细胞膜之间形成紧密接触,对生物膜上离子通道的电活动进行记录。其主要研究对象是细胞膜或细胞器膜上的离子通道,另外也可以对其它跨越生物膜的离子电流进行记录,如转运体、交换体、泵电流等。膜片钳技术革命性地简化和改善了人们直观而灵活观察离子通道蛋白质的生理活动的研究,是离子通道为靶点的科研和药物开发的必要手段。

  • 离体心脏灌流的实验对象,实验方法,实验机理及作用目的?

    Langendorff离体灌流心脏测试通过将动物(如豚鼠、兔等)的心脏解剖分离后在体外用含有氧气的生理营养液灌流以维持正常的节律跳动和生理功能,然后将测试的药物通过灌流液作用于心脏,可以直观全面地反应药物本身对心电图和心肌收缩力的影响,避免了整体动物实验中可能出现的复杂系统因素,如神经和内分泌系统对心脏的作用。

  • 动作电位的实验对象,实验方法,实验机理及作用目的?

    心脏的正常功能依赖于心肌细胞动作电位的产生和传导。心肌细胞多种离子通道是其动作电位形成的生理基础。通过对从动物心脏分离出心肌细胞或蒲肯野氏纤维进行胞内动作电位记录测试药物对动作电位的影响可以很好地反应药物对心脏多种离子通道的综合作用,从而判断药物引起心律失常的潜在危险。

  • 什么是室性扭转性心律失常(TdP)?

    尖端扭转型室速是较为严重的一种室性心律失常,发作时呈室性心动过速特征,QRS波的尖端围绕基线扭转,典型者多伴有QT间期延长。其发生机理与折返有关,因心肌细胞传导缓慢、心室复极不一致引起。常反复发作,易致昏厥,可发展为室颤致死。常见病因为各种原因所致的QT间期延长综合征、严重的心肌缺血或其他心肌病变、使用延长心肌复极药物(如胺碘酮等)以及电解质紊乱(如低钾、低镁)。

  • QT间期延长综合症的病因及临床表现?

    心律失常造成,从临床角度可分为二型:一型为肾上腺素能依赖QT间期延长综合征。此型包括贾-兰综合征、瓦-罗综合征等病因不明的患者,以及蛛网膜下腔出血或植物神经系统手术的患者。在用力、惊恐、疼痛、激动等交感神经张力增高的情况下容易发病。发病时心率加快,U波指幅增高,QTU间期延长,然后出现尖端扭转型室性心动过速发作,最后可致心室颤动。室性快速心律发作时可有眩晕发作,重者意识丧失,抽搐,猝死。另一型为心跳暂停依赖QT间期延长综合征。此型包括药物作用、电解质平衡失调、营养不良、缓慢心律等条件下发生的患者。当心率减慢或在心搏间长间歇之后U波增大,在U波顶上发生尖端扭转型室性心动过速,最后也可发生心室颤动。原因不明或先天性的患者在不同时间可有QT间期和T、U波的变化,发作时出现症状,不发作时可无症状。

  • 什么是离子通道病?

    离子通道病是指离子通道的结构或功能异常所引起的疾病,具体表现在编码离子通道亚单位的基因发生突变或表达异常,或体内出现针对通道的病理性内源性物质时,离子通道的功能发生不同程度的减弱或增强,导致机体整体生理功能紊乱,形成某些先天性或后天获得性疾病,主要累及神经、肌肉、心脏、肾脏等系统和器官。迄今为止,研究比较清楚的离子通道病主要涉及钾、钠、钙、氯通道领域。